重磅！非洲猪瘟疫苗已具备生产应用条件，按照农业农村部部署，完成94万瓶，3000余万头份的生产储备
为猪商城 / 2021-06-28
6月19-20日，由中国兽医药品监察所、中国兽药协会联合举办的第八届中国兽药展览会在河南郑州隆重召开。本届展览会以贯彻总书记对农业科技创新系列讲话精神为主线，以“绿色发展 合作共赢”为主题，充分展示改革开放以来我国兽药行业取得的辉煌成绩和新时代兽药人的精神风貌，献礼中国共产党百年诞辰。展会举办多场次主题鲜明、形式新颖、高水平的报告会、学术讲座、专题论坛。安排了兽药科研成果信息发布、成果转让签约、新版兽药GMP相关设备产品推介会等系列活动，加快推进兽药科技的做大做强，助力新版兽药GMP的顺利实施。在主题报告会上，哈尔滨兽医研究所步志高所长应邀作《非洲猪瘟防控与疫苗研制进展》专题报告。
步志高所长首先强调了非洲猪瘟疫苗研发的重要性并介绍了非洲猪瘟疫苗的研制进展。2018年10至11月，分离获得我国流行非洲猪瘟病毒株，完成了全基因组序列测定和分析，建立了感染发病模型；2018年11月至2019年5月，以我国流行毒株为基础，经系统安全性和有效性研究，筛选出1株安全有效的弱毒疫苗HLJ/18-7GD株；2019年6月至2020年2月，初步完成了疫苗实验室产品质量研究、大规模生产工艺研究及中间试制、生物安全评价中间试验。2020年3月24日始，先后在黑龙江、河南和新疆的4个独立猪场开展生物安全评价环境释放试验和第一阶段临床试验，包括育肥猪3077头、能繁母猪28头和家杂野猪25头。2020年10日3日起，先后在黑龙江、河北和湖北5个试验猪场开展安全评价生产性试验和第二阶段临床试验，育肥猪11410头、母猪201头。黑龙江肇州、湖北武昌、河北巨鹿和黑龙江双城四个基地育肥猪试验已顺利完成，有关样品检测、数据分析、总结报告等有序推进中。母猪安全评价生产性试验已完成第一胎，第二胎试验有序进行之中。步志高所长表示，当前非洲猪瘟疫苗研发主要面临以下挑战：非洲猪瘟病毒结构庞大复杂，基因组超过180Kb，约编码150余个潜在基因；灭活或亚单位疫苗难以诱导中和抗体，难以提供有效保护，弱毒疫苗理论上更具可行性；病毒只感染并致死猪和野猪，体外只能在猪原代巨噬细胞增殖，难以通过传代致弱途径获得安全有效弱毒疫苗；通过精准删除毒力和免疫抑制基因，获得安全有效弱毒疫苗是目前相对可行的技术路线。
步志高所长介绍了非洲猪瘟弱毒疫苗构建策略和1种7基因联合缺失方案成功构建候选弱毒疫苗，经研究，该疫苗不致死不致病SPF猪，遗传稳定，体内连续传代不返强，免疫猪对强毒致死攻击提供有效保护。研究调查发现，非洲猪瘟基因II型低致死自然突变株临床症状表现为关节肿胀、瘫痪、皮肤肿块、皮肤坏死。较低剂量不致死，较高剂量致死率40-60%。国内自然变异株为CD2v编码核苷酸突变或缺失HAD表型丧失。
HLJ/18-7GD免疫有效阻断低致死自然变异株水平传播
第一阶段田间试验包括育肥猪、母猪及野猪安全评价环境释放试验和针对商品育肥猪的安全性、有效性临床试验。2020年3月23日农业农村部批准在3省区开展第一阶段临床试验。黑龙江、河南和新疆三个封闭基地开展首期临床试验，先后入组2962头育肥仔猪，分别于4月6日、5月10日和6月8日启动免疫。大庆肇州31-37日龄育肥猪1060头，4月6日首免；洛阳孟津39-47日龄育肥猪562头，5月10日首免；石河子150团37-43日龄育肥猪1340头，6月8日首免。商品育肥猪3000余头，能繁母猪28头及其分娩仔猪和家杂野猪25头均严格生物安全隔离，不得销售或利用，全部无害化处理。第二阶段田间试验是育肥猪、母猪生物安全生产性试验和商品猪的安全性、有效性临床试验。2020年8月20日农业农村部批准进入生物安全评价生产性试验阶段。黑龙江省两个封闭试验基地先后入组3400头育肥仔猪及201头怀孕母猪，自10月3日起先后注苗，开展田间环境下的生物安全生产性试验。黑龙江省肇州市及牡丹江市生物安全生产性试验10月3日首免。2020年9月18日农业农村部批准在3省区开展第二阶段临床试验黑龙江、河北和湖北等四个临床试验封闭基地开展第二阶段临床试验，先后入组7900、2020和1970头育肥仔猪，分别于10月4日、10月18日和10月18日启动免疫。大庆肇州和双城31~37日龄育肥猪7900头，10月4日首免（哈兽研ABSL-3攻毒评价）；河北巨鹿基地37~43日龄育肥猪2020头，10月18日首免（中国ACDC ABSL-3攻毒评价）；河北武汉基地39~47日龄育肥猪1970头，10月18日首免。商品育肥猪3000头能繁母猪200头及其生产仔猪均严格生物安全隔离，不得销售或利用，全部无害化处理。单剂量（5.0lg）一次接种，2个月后攻毒存活保护50%左右；单剂量（5.0lg）两次接种，2个月后攻毒存活保护80%以上；10倍剂量（6.0lg）一次接种，2个月后攻毒存活保护80%以上。
步志高所长表示对非洲猪瘟病毒核酸检测方法需要进行调整，目前所有样品编盲，重复采集三份，GCP中心检测、留样各一份，中监所平行检测一份。步志高所长指出目前需要围绕新剂量标准补充质量研究资料尤其是对其安全性和有效性。团队先后在五省区的8个猪场开展共14487头商品育肥猪的田间试验，分别观测132天至184天。并对田间试验100万余猪次临床观察记录、910头猪2.5万余次体温记录和2100头猪剖检观察记录的数据分析表明：疫苗接种对育肥猪生长无显著影响，未观察到因疫苗接种引起的明显临床异常及病理损伤。在第一阶段育肥猪临床试验中，疫苗接种猪及其同居猪平均死淘率为2.6%，对照组猪平均为1.8%。第二阶段育肥猪临床试验中，疫苗接种猪及其同居猪平均死淘率为13.4%，对照猪为14.1%。结果表明：疫苗接种猪和同居猪的死淘率与对照猪无显著差异。试验猪群的猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)的混合感染普遍，继发细菌性疾病情况复杂。临床试验猪群的总体死淘率与相同来源仔猪、相似养殖环境场猪群的平均水平相当。疫苗接种组和同居组与对照组无显著性差异，表明疫苗接种对猪群死淘率无影响。随机选取850头育肥猪定期称重监测疫苗接种后体重增长情况。疫苗接种后4个月，免疫猪、同居猪和对照猪平均体重分别为111.0±10.9kg、113.3±9.7kg和109.9±11.2kg，平均日增重分别为0.81±0.10kg、0.83±0.08kg和0.80±0.10kg。免疫接种猪、同居组猪及对照猪之间无显著性差异，表明疫苗接种对育肥猪生产性能无影响。按照试验方案，疫苗接种后至出栏前，定期采集试验猪抗凝血液、口肛拭子及剖检组织样品60000余份，检测疫苗毒核酸。疫苗接种后在育肥猪体内呈低水平复制，可在部分免疫猪口肛拭子中检测到疫苗病毒核酸，主要在接种后5周内，无持续排毒。田间试验中，疫苗以0.1-10倍剂量共接种11880头商品育肥猪，接种后分别观测132天至184天不等，未观察或检测到疫苗毒株毒力返强。疫苗接种后定期采集血清样品7500余份，检测非洲猪瘟及其他5种重要猪病原共8种特异抗体。疫苗接种后第1、2和3个月，非洲猪瘟疫苗特异抗体转阳率分别为69.1%(661/957)、80.6%(684/849)和93.0%(824/886)。单剂量和10倍剂量同居猪(与疫苗接种猪同圈混养的未接种猪)同居饲养1、2和3个月抗体转阳率分别为0%(0/204)、1.2%(2/172)和4.4%(8/180)。疫苗接种猪同舍饲养的未接种疫苗对照猪以上3个时间点均未检测到抗体转阳(0/429) 。结果表明，疫苗传播能力低，无连续水平传播能力。非洲猪瘟弱毒疫苗接种对猪瘟、猪蓝耳病、口蹄疫、伪狂犬和圆环病毒等其它常规疫苗接种免疫效果无干扰。田间试验期间，免疫接种育肥猪先后8次分别转运至哈兽研和中国动物CDC的生物安全实验室，采用非洲猪瘟强毒致死攻击保护试验。结果，存活保护率82.6%至100%，平均89.3%(143/160)；单剂量—次接种保护持续期2个月以上。步志高所长表示弱毒苗对母猪及生产仔猪健康和生产性能无影响。团队先后在黑龙江北安市和牡丹江市的2个猪场开展能繁母猪农业转基因生物安全评价环境释放试验和生产性试验，分别设单剂量接种组、10倍剂最接种组及未接种对照组。疫苗接种后，环境释放试验28头母猪观察了183天，生产性试验201头母猪已观察217天。疫苗接种母猪后未观察到慢性或急性临床不良反应，生长状况良好，发情与受孕及胚胎发育正常疫苗接种母猪流产率为1.23%，单胎平均产仔数及健仔率分别为11.587.3%;对照母猪的流产率为2.56%;单胎平均产仔数及健仔率分别为11.6及87.6%；疫苗接种组与对照组相比无显著性差异，与提供试验母猪场同期的另外5O4头母猪相当。目前生产性试验母猪免疫后第二胎试验仍在继续进行中。生产性试验中，随机选取测定901头仔猪出生重，760头仔猪断奶重。疫苗免疫组母猪产仔猪与对照组母猪产仔猪相比均无显著性差异。生产性试验中，随机选取单剂量接种母猪18胎和10倍剂量母猪7胎的新生仔猪，每胎随机选取3头剖检，检测血液和组织中疫苗毒核酸。结果阳性仔猪比例单剂量母猪组为11.1%(6/54)，10倍剂量组母猪组为19.0%(4/21)，阳性仔猪主要来自妊娠中后期接种母猪。进一步对新生仔猪血液、口肛拭子和脏器样品等进行跟踪监测，结果表明，疫苗毒在仔猪出生后2个月内均被机体有效清除。环境释放试验母猪分娩仔猪随机选取30头观察至142日龄。生产性试验母猪分娩仔猪23窝共219头已观察至127日龄。临床表现，统计分析结果显示死淘率、增重等指标均无异常。疫苗接种对繁殖母猪发情、受孕、妊娠无影响；对母猪产仔数、健仔率及仔猪出生重、断奶重等生产指标无影响。1. 通过实验室1100余头SPF猪安全性和有效性实验研究，以及田间14487头商品育肥猪和229头能繁母猪试验，已有的数据表明，非洲猪瘟弱毒疫苗(HLJ/18-7GD株)遗传稳定，接种后不致病、不返强，对育肥猪生长发育、增重和死淘等无不良影响；对田间商品猪存活保护率80%以上。2. 对接种母猪繁殖性能无明显影响，对分娩仔猪健康状况及生产性能无明显异常。鉴于繁殖母猪生产利用周期长达3-5年，疫苗接种的持续影响有待进一步观测。3. 大规模生产工艺可行，质量可控，成本经济，已具备生产应用条件。步志高所长提到，哈兽研全资下属哈尔滨维科生物技术公司的建成非洲猪瘟疫苗生产线，2020年9月30日通过兽药GMP静态验收。按照农业农村部部署要求，依据疫苗制造及检验试行规程，顺利完成94万瓶，3000余万头份的生产储备。步志高所长在会议中建议疫苗限用于全进全出商品育肥猪。暂不用于繁殖用的母猪及种公猪。步志高所长强调，要高度重视、积极推进非洲猪瘟疫苗研发工作，坚持尊重科学规律，坚持时间服从质量，严格按照程序开展研发工作，确保疫苗的安全性、有效性，确保经得起科学和实践检验，为生猪产业健康发展作出贡献。要充分认识疫苗研发对我国生猪生产的重要性，按照时间服从质量、稳妥有序推进的要求开展研发工作，力争早日投入生产应用。
